’段）。血液溶浆机米氏方程式的推导以两个假设为前提：!稳态观念，当酶促反应趋于稳态时 ()的生成速率与分解速率相等。"酶促反应中［)］大大高于［(］，因此［)］的变化在反应过程可忽略不计。反应式中 !"、!+和 ! 代表各反应的速率常数。鉴于反应过程中，不断有一部分 (与 )结合生成 ()，故游离酶浓度为总酶浓度(,) ［(］中减去生成 ()中的酶浓度，即［游离酶］=［(］［()］，这样 ()生成速率 = !"［(］［()］·（,）（）［)］()分解速率 = !［+()］* !［()］（#） ,$$当反应处于稳态时，()生成速率 = ()分解速率，即 （［(］［()］）·［)］［()］* !［()］!"= !+,（［(］［()］）［)］!+* ! , ［()］ = !" $$设 !+ !*" ! ,= #> $$ #>则［)］［()］［)］= #>为米氏常数，［(］［()］ $$整理后［()］=［ #>(］*［［))］］（!） $$由于反应速率 " = !［()］（C） , 第五章 !酶!"!!!将（"）式代入（#）式： ［&］! $ "#%()［［ ’’］］ （*） !!当［’］很高时，所有 &都与 ’生成 &’，反应达最大反应速率，此时［&］$［&’］，即 !(+, $ " %［&］［&’］$ " %（-） !!将（-）式代入（*）式，即得米氏方程式： !(+,［’］! $ #()［’］ !!（三） #(和 !(+,的意义 ! !./当 ! $ !(+, ，即反应速率为最大速率一半时，米氏方程为： 0!(+, !(+,［’］ 0$ #()［’］ 1! #($［’］ !!这表示 #(值等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度。 ! !0/一些酶
的 " 0 8" %，即 &’解离成 &和 ’的速率明显超过分解成 &和 2的速率， " %可忽略不计，则 #( $ "" 0 ，即此时 #(近似 &’的解离常数 #3。在这种情况下 #(可表示酶对底物的亲和力。 ." 0 ［&］［’］#($ " $［&’］ $ #3 . !! #(值愈小，酶和底物亲和力愈大，这表示不需要很高的底物浓度就可达到最大反应速率。但并非所有酶促反应中 " %都远小于 " 0，所以 #3值和 #(值涵义不同。 ! !%/ #(值是酶的特征性常数，它与酶的结构，酶所催化的底物和反应环境如温度、 45、离子强度等有关，而与酶浓度无关。 #(的单位是 (67 8 9，大多数酶的 #(值在 .: # ;.: 0(67 89之间，不同种类酶的 #(值不同（表 "-）；如一种酶有多个底物，则酶对每一种底物都有其各自特定的 #(。表 ! "#某些酶的 !$值酶!名!称底!!物 #( （8((67·9.）过氧化氢酶 50<0 0"碳酸酐酶 50=<%>胰糜蛋白酶甘氨酰酪氨酰甘氨酸 .:!半乳糖苷酶 ?乳糖 @/ :己糖激酶 ?果糖 ./ " AB2 :/@ ?葡萄糖 :/ :." ! !@/ !(+,是酶被底物完全饱和时的反应速率。 !!当［&’］等于总酶浓度［&B］，即酶被底物完全饱和时： ［&B］!(+, $ " %!!如果知道酶的总浓度和 !(+,，即可计算出酶的转换数（CDEF6GHE FD(IHE）：当酶被底物完全饱和时，单位时间内每个酶分子（或活性中心）催化底物转变成产物的分
子数。 #"!第一篇 (生物分子的结构与功能" #$%!!" ［&’］ (( !!即为酶的转换数，大多数酶的转换数在（) *)+,）-.之间。 ((（四） ##和 " #$%的测定 ((从图 / ),中可知，由于底物浓度对反应速率影响呈矩形双曲线，难以从该图中准确测得 " #$%和 ##。如将米氏方程两侧取倒数处理，便得到下面方程式： )##))" " " #$% ［0］1 " #$% (((((图 / )/(双倒数作图法图 / )2( 3$45.作图法 (((( ((以 )"对［)0］作图，可得直线图（图 / )/），称林贝氏（674585$95: ;<:=）作图或双倒数作图。从此图>）。三、 !"对酶促反应速率的影响 ((酶分子中有许多可解离的基团，其在不同 ?3条件下解离状态不同，所带电荷的数量和种类也不同。一种酶通常在某一 ?3时的解离状态最有利于酶的正确的空间构象的形成。酶催化活性最大时的环境 ?3称为酶促反应的最适 ?3（ @?A B7#<# ?3）。此时酶的各个必需基团的解离状态，包括辅酶及底物的解离状态适合酶发挥最大活性。各种酶的最适 ?3不同（图 / )C）。动物体内酶的最适 ?3在 2D/ *C之间，接近中性。但少数酶也有例外，如胃蛋白酶的最适 ?3为 )D C，精氨酸酶的最适 ?3为 ED C。 ((最适 ?3不是酶的特征性常数，它受底物浓度，缓冲液的浓度和
